酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）因其具有敏感性高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于臨床檢測(cè)中的各種抗原和抗體的測(cè)定。盡管ELISA操作簡單，但是小實(shí)驗(yàn)里也蘊(yùn)含著大文章，ELISA操作各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大，稍不注意就會(huì)產(chǎn)生假陽性或假陰性的結(jié)果。

　　一般，ELISA可分為以下四大類：直接ELISA、間接ELISA、夾心ELISA、競(jìng)爭抑制ELISA。其他的ELISA都隸屬于這四類ELISA或由這四類ELISA組合衍生。

　　樣品收集和保存

　　用于ELISA測(cè)定常用的臨床標(biāo)本是血清（漿）。要注意避免嚴(yán)重溶血，因?yàn)檠t蛋白中含有具有類似過氧化物活性的血紅素基團(tuán)，在孵育時(shí)很容易吸附于固相，與HRP底物反應(yīng)產(chǎn)生假陽性。

　　樣品采集及血清分離中要注意避免細(xì)菌污染，一方面細(xì)菌分泌的酶可能對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用，另一方面，細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶會(huì)對(duì)相應(yīng)酶作標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾。

　　樣品應(yīng)該要避免反復(fù)凍融。因反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。另外，樣品混勻時(shí)，不要?jiǎng)×艺袷帲磸?fù)顛倒混勻即可。

　　一般而言，如果在收集樣品的當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)，可將樣品及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?；而?duì)隔天再檢測(cè)的樣本，應(yīng)及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?，若要長期保存樣品，將其置于-70℃凍存。